La plateforme ImageUP dispose d’un cytomètre analyseur et trieur de cellules: BD FACS Aria III. NOUVEAU: ce cytomètre est désormais sous une hotte P2 (voir plus bas)

Le tri peut être défini comme la séparation physique de cellules ou de particules d’intérêt à partir d’une population hétérogène.
Le cytomètre en flux utilise le principe de la déflexion électrostatique de gouttes chargées comme dans les imprimantes à jet d’encre. Les cellules sont aspirées de l’échantillon et injectées une à une par une buse dans un courant continu de PBS.
En appliquant au jet, une onde de vibration d’une fréquence et d’une amplitude déterminée, il va se rompre pour donner des gouttes à un point précis caractérisé par sa position et son temps d’apparition appelé « break of point ». Au moment de l’interception de la cellule avec le faisceau laser, la lumière déviée et la fluorescence émise génèrent un signal qui est traité par le programme de tri afin de décider si la cellule doit être isolé ou non selon les critères définis par l’utilisateur. La distance entre l’interception du laser avec la cellule et le « break of point » est appelé le « drop delay ». Si une cellule d’intérêt devant être triée a été détectée, le cytomètre attend qu’elle arrive jusqu’au « break of point »pour charger la goutte. Comme celle-ci contient la cellule à trier, en passant entre les plaques de déflexion fortement chargées, elle est déviée du côté de la plaque de polarité opposée et collectée. En appliquant différent niveau de charge à gauche et à droite, il est possible de trier plusieurs populations simultanément.

Le BD FACSAria III permet :

– Trier jusqu’à 4 populations simultanément.

– Le module ACDU (automated cell deposition unit) permet de déposer les gouttes triées dans des plaques ou sur des lames en plus du tri classique en tube.

– Trier de 1 à 999 999 cellules par position sur des microplaques de 24, 96 puits ou 384 puits, des lames ou des tubes

– Trier dans des conditions de température contrôlée (4, 20, 37 et 42 °C) et dans des conditions aseptiques.

– Trier à différentes pressions (5 à 75 psi) et avec quatre tailles de buses (70, 85, 100 µm) pour trier divers types des particules.

– L’acquisition simultanée de 18 paramètres (FSC, SSC et 16 fluorescences).

– L’acquisition à une vitesse maximale de 70.000 évènements/sec.

Le cytomètre est piloté par le logiciel FACS Diva et il est relié à une imprimante couleur.

Sources d’excitation:

Pour savoir plus : http://www.bdbiosciences.com/instruments/facsaria/index.jsp

La Hotte de protection de classe II, Noroit, permet d’héberger le cytomètre trieur de cellules BD FACS ARIA III. L’objectif est d’assurer le confinement biologique du cytomètre hébergé, la stérilité de l’échantillon, la protection du manipulateur et de l’environnement.

• La hotte de classe II est conçue dans le respect de la norme EN12469-2000.
• Cette hotte est équipée de filtres de type HEPA (High Efficiency Particulate Air) H14, garantissant une efficacité de 99,999% sur les particules de 0.3µm. La manipulation est protégée en classe 100 – ISO5.
• La hotte est équipée d’une très forte veine de garde, afin de compenser les perturbations du flux d’air du FACS ARIA.

Ce matériel a été financé par l’Université de Poitiers, dans le cadre d’une demande de financement sur projet, année 2020.

Responsable: Adriana DELWAIL